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miRNA在三個(gè)方面與信使核糖核酸不同：
(1)miRNAs是相當(dāng)小的分子，豐度差異較大
(2)成熟miRNAs與其前體pre-miRNA和primiRNA共存，只是長(zhǎng)度不同
(3)許多miRNAs序列非常接近，例如同源分子，只是一個(gè)或幾個(gè)核苷酸不同。
所以，常規(guī)芯片技術(shù)不能直接用于分析這些分子。?一些miRNA芯片產(chǎn)品市面上也可買(mǎi)到，但是這些產(chǎn)品或者繁瑣需預(yù)分離microRNA，或者缺乏分辨力不能區(qū)分同源之間的差異，或者對(duì)低豐度的miRNAs不夠敏感。
T7-OLA技術(shù)產(chǎn)品可分辨同源miRNA，其原理是對(duì)每一個(gè)miRNA分子，有二條引物（oligo）來(lái)識(shí)別，每條引物只識(shí)別miRNA一半的序列。其中的一個(gè)引物中含有標(biāo)示序列（Tag），另外一個(gè)引物含有T7啟動(dòng)子序列。只有序列完全匹配的時(shí)候，兩種引物才能和miRNA雜交，形成RNA/DNA的雜合體。即使只有一個(gè)核苷酸不匹配都會(huì)造成雜交或者隨后鏈接的失敗。為了增加分子的穩(wěn)定性，該RNA/DNA的雜合體被延伸了一段序列（加入的另一對(duì)寡核苷酸與上述引物在T7和Tag部位互補(bǔ)）。含有生物素（biotin）的段序列通過(guò)互補(bǔ)結(jié)合到其中一條引物上。通過(guò)結(jié)合有親和素的磁珠分離出雜合體。然后兩引物在T4連接酶的作用下，被連接成一個(gè)DNA片段，隨后經(jīng)過(guò)線性擴(kuò)增（轉(zhuǎn)錄），含有生物素的UTP整合到RNA序列中。把轉(zhuǎn)錄好的RNA序列和預(yù)先準(zhǔn)備好的含有不同miRNA序列的膜，進(jìn)行雜交。最后加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的親和素進(jìn)行反應(yīng)，加入發(fā)光底物測(cè)定。

圖1. miRNA 芯片分析的流程圖

T7-OLA(oligo Ligation Assay)芯片具有以下優(yōu)點(diǎn)：
(1)高識(shí)別力-可以區(qū)分所有的let7 miRNA isoforms,即便是只有一個(gè)核苷酸的差別，也能被檢測(cè)出來(lái)
(2)高靈敏度-可以檢測(cè)出的微量microRNA
(3)線形擴(kuò)增-芯片所捕捉的miRNAs會(huì)被T7啟動(dòng)子擴(kuò)增，而不必 像其他產(chǎn)品那樣，是通過(guò)PCR來(lái)擴(kuò)增，PCR的缺點(diǎn)是可能引入一些干擾因素，從而使得結(jié)果分析會(huì)出現(xiàn)偏差
(4)無(wú)需事先純化miRNA,總RNA可以直接進(jìn)行分析
(5)實(shí)驗(yàn)過(guò)程簡(jiǎn)單，無(wú)需購(gòu)買(mǎi)PCR,定量PCR儀,以及熒光檢測(cè)儀等昂貴儀器